हेमोसाइटोमीटर सेल गिनती प्रक्रिया

हेमोसाइटोमीटर उन्नीसवीं सदी के प्रारंभ से ही मौजूद है, जब उन्हें चिकित्सा प्रयोजनों के लिए रक्त कोशिकाओं की सटीक गिनती करने के लिए बनाया गया था। जैविक नमूनों में कोशिकाओं के घटक को मापने के लिए एक मानकीकृत और विश्वसनीय विधि प्रदान करके विज्ञान के क्षेत्र में क्रांतिकारी परिवर्तन किया गया. हेमोसाइटोमीटर विभिन्न वैज्ञानिक विधाओं से अभिनव अवधारणाओं का प्रयोग करते हैं, जो भौतिकी, रसायन और जीवविज्ञान के सिद्धांतों को जोड़ते हैं। सतह तनाव का उपयोग करके, कोशिकाएं हेमोसाइटोमीटर के गिनती क्षेत्र में समान रूप से वितरित होती हैं, जिससे प्रतिनिधि नमूने हों . डिवाइस में एक ग्रिड पैटर्न शामिल है, जो आमतौर पर कांच की सतह पर तराशा जाता है, जिससे कोशिका की सघनता और घनत्व का सटीक मापन हो सकता है। यह शोधकर्ताओं और चिकित्सकों को लाल और सफेद रक्त कोशिकाओं की गिनती, प्लेटलेट स्तर, और कोशिका का आकारविज्ञान जैसे विभिन्न पैरामीटरों का विश्लेषण करके व्यक्ति के स्वास्थ्य का मूल्यांकन करने की अनुमति देता है। इसके अतिरिक्त, हेमोसाइटमिति द्वारा प्राप्त परिणामों का सांख्यिक महत्व सटीक निष्कर्ष निकालने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हेमोसाइटोमीटर का उपयोग रक्त विश्लेषण से परे, माइक्रोबायोलॉजी, पशु चिकित्सा, और औद्योगिक अनुसंधान जैसे विभिन्न क्षेत्रों में अनुप्रयोगों को खोजने के लिए बढ़ गया है. इस बात से वैज्ञानिक जांच और चिकित्सा निदान में हेमोसाइटमिति की बहुविधता और स्थायी प्रासंगिकता को बल मिलता है।

सेल गणना और सेल घनत्व को मापने में आवश्यक उपकरण हेमोसाइटोमीटर नौ 1x1 mm (1 mm ²) क्षेत्रों को विभाजित करने वाली सावधानी से नक्काशीदार रेखाओं से अधिक प्रदान करता है। अधिक सटीकता प्रदान करने के लिए, प्रत्येक क्षेत्र का उपयोग होने वाले हेमोसाइटोमीटर के विशिष्ट संस्करण के आधार पर समान आकार के 16 या 25 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है। ये छोटे वर्ग, विश्लेषण के लिए कोशिकाओं के समरूप वितरण को सुनिश्चित करने के लिए एक ग्रिड पैटर्न बनाने के द्वारा सटीक गिनती करने में मदद करते हैं।

गिनती प्रक्रिया के दौरान, विशेष रूप से डिजाइन किए गए स्लाइड को कक्ष के ऊपर रखा जाता है, जिससे कक्ष की सतह और तल के बीच एक संकीर्ण 0,1 मिमी अंतर हो जाता है। यह जानबूझकर दूरी एक महत्वपूर्ण उद्देश्य की पूर्ति करता है: यह विश्लेषण के लिए एक ज्ञात खंड निर्धारित करता है। कक्ष के आकार एवं अंतर को देखते हुए 0.1 mm ³ (1E-4 mL के बराबर) का सही परिमाण प्राप्त होता है।

जब कक्ष में कोशिकाएं प्रवेश की जाती हैं, तो वे स्वाभाविक रूप से अंतराल के भीतर उपलब्ध स्थान घेरती हैं। परिणामस्वरूप, 1 mm² के प्रत्येक क्षेत्र में दिखाई देने वाली कोई भी कोशिकाएं 1E-4 mL परिमाण में मौजूद कोशिकाओं के प्रतिनिधि हैं। यह सरल डिजाइन शोधकर्ताओं और वैज्ञानिकों को कोशिका घनत्व को एक छोटे पैमाने पर निष्कर्षण करने में सक्षम बनाता है, प्रति मिलीलिटर (cells/mL) की मात्रा को मापने योग्य माप प्रदान करता है।

आप 4 x 1mm² सेक्टरों में सेल गिनते हैं और आपको निम्नलिखित गिनती 31,25,40,33 मिल जाती है - औसत 32,25 सेल्स प्रति 1mm². आप जानते हैं कि क्षेत्र 1E-4 mL आयतन के अनुरूप है, इसलिए 1E-4 mL में 32,25 कोशिकाएं मौजूद हैं, जिसके फलस्वरूप 322.500 cells/mL घनत्व होता है. कोई सूत्र शामिल नहीं है – हमने सिर्फ अनुमान लगाया है कि कोशिका घनत्व हेमोसाइटोमीटर परिमाण पर आधारित है। इसे सामान्य मामले तक फैलाते हुए, यह सूत्र सेल घनत्व = (कुल कोशिकाओं की गणना / वर्गों की संख्या की गणना) / एक ही वर्ग का आयतन होगा – जो किसी भी प्रवर्तित विस्तार का वर्णन नहीं करता।

1mm² वर्गों के लिए, एकल वर्ग का आयतन 1E-4 था, लेकिन सेल की गिनती के लिए चुना गया वर्ग आकार के आधार पर यह अलग हो सकता है. उदाहरण के लिए, केंद्रीय वर्ग के अंदर के छोटे वर्गों का लाल रक्त कोशिकाओं की गिनती के लिए प्रयोग किया जाता है। उस स्थिति में, वर्ग आयतन 1E-4 mL / 25 है (1mm ² केन्द्रीय वर्ग में 25 छोटे वर्ग होते हैं), जिससे 4E-6 mL छोटा वर्ग आयतन होता है.

एक और विशेष रूप से उपयोगी मेट्रिक है जो हेमोसाइटोमीटर की गिनती से प्राप्त की जा सकती है: व्यवहार्यता। सुसंगतता संस्कृति में सभी कोशिकाओं के बीच जीवित कोशिकाओं की मात्रा का एक माप देती है। इसे गिनती के समाधान में एक रंग मिला कर मापा जा सकता है जो मृत कोशिकाओं को धब्बे में डालता है, लेकिन जीवित कोशिकाओं को नहीं – वे तब गिनती के दौरान अलग से दर्ज की जाती हैं और जीवन यापन की गणना जीवित कोशिकाओं / कुल कोशिकाओं के रूप में की जाती है (प्रतिशत के रूप में).

कोशिका घनत्व एक स्वस्थ संस्कृति बनाए रखने के लिए, उप-संस्कृति, सेल बैंकों का निर्माण, प्रवाह-साइटमिति और ELISA के लिए नमूने तैयार करने के लिए, और केवल प्रकाशित करने के लिए अपनी संख्या का ट्रेक रखने के लिए महत्वपूर्ण है। दूसरी ओर, जीवन यापन स्वाभाविक रूप से संस्कृति के स्वास्थ्य के लिए एक चिन्ह है; विषाक्तता परीक्षणों में यह समझने के लिए उपयोगी है कि एक विशिष्ट समय सीमा में कितनी कोशिकाएं एक साइटोटॉक्सिक एजेंट के द्वारा मारी जाती हैं।

हेमोसाइटोमीटर का उपयोग अन्य क्षेत्रों में भी बढ़ गया है। यह अब नियमित रूप से ब्रू करने के लिए किरण के दौरान और शहद उत्पादन के दौरान खमीर की घनत्व और गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोग किया जाता है जब अंतिम उत्पाद में पराग घनत्व का निर्धारण किया जाता है। उपयोग किए जाने वाले कक्षों के साथ स्वचालित सेल काउंटिंग की अनुमति देने के लिए हेमोसाइटोमीटर का भी प्रौद्योगिकी विकसित किया गया है, जो लगभग तत्काल परिणाम प्रदान करता है। यह नया दृष्टिकोण बहुत अच्छी तरह से आम सेल लाइन के लिए काम करता है (और काफी समय की बचत करता है!) लेकिन दुर्लभ रोगों वाले मरीजों की कोशिकाओं जैसे अधिक कस्टम अनुप्रयोगों के लिए बारी-बारी की आवश्यकता हो सकती है।

हेमोसाइटोमीटर के साथ कोशिका की गिनती बहुत दोहरावदार और समय की आवश्यकता हो सकती है। विशेष रूप से जब आपको प्रतिदिन 10-20 नमूनों से गुजरने की जरूरत है, व्यवहार्य कोशिकाओं की गिनती करें और उन सभी के लिए समय पर गणना करें।

HemocyTap एक एप्लिकेशन है जो कोशिकाओं की गिनती करने में मदद करता है और उन दैनिक गणनाओं को स्वचालित रूप से कार्यान्वित करता है. लाइव व मृत कोशिकाओं की गणना करें, सेल घनत्व, व्यवहार्यता & नई संस्कृति आयतन की गणना करें, अपने डेटा को ईमेल से सहेजें और समय के साथ प्लाट करें. इस अनुप्रयोग की मुख्य विशेषताएं हैं:

1. दो मिलान काउंटर का उपयोग करें: एक जीवित कोशिकाओं के लिए और एक मृत कोशिकाओं के लिए।
   2. प्रत्येक एक विशिष्ट ध्वनि निकलती है जो आपको बताती है कि किस बटन को दबाया जाना चाहिए
   3. प्रत्येक कक्ष को आपके द्वारा गणना की जाती है
   4. आप जिस वर्ग की गणना कर रहे है उस वर्ग को माइक्रोस्कोप में देखने योग्य बदलते हैं
   5. डिफ़ॉल्ट वर्ग चुनें जिसे आप गिनना चाहते हैं; वे उभारे जाएंगे.
   6. मध्य चौराहे के अन्दर छोटे-छोटे चौकोर को गिनना है
   7. आपके लिए आपकी गिनती का औसत गणना करता है
   8. आपको बताता है कि उप- कल्चरिंग के दौरान आवश्यक कक्ष घनत्व पाने के लिए कितना वॉल्यूम जोड़ना है
   9. सेल पर सजीवता तथा लाइव सेल क्रमांक दिखाता है                              
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