इस लेख में हम टनल के दागने के परीक्षण के बारे में सब कुछ जानने की जरूरत है पर चर्चा करेंगे। हम शुरू करके बताएंगे कि टनल का रंग क्या है और यह कैसे काम करता है।

इसके बाद, हम विभिन्न प्रकार के ट्यूनेल दागों पर चर्चा करेंगे। फिर, हम अन्य अपॉप्टोसिस परीक्षणों की तुलना में टनल के दाग लगाने के लाभों पर गौर करेंगे।

अंत में, हम टनल के रंग को सही ढंग से करने के लिए कुछ नुस्ख़े प्रदान करेंगे।

टनल परीक्षण अपॉप्टोसिस, या सेल मौत के सिद्धांत पर आधारित है। अपॉप्टोसिस एक प्रक्रिया है जिसके द्वारा कोशिकाएं स्वयं नष्ट होती हैं ताकि वे स्वयं को ऐसी स्थिति से दूर कर सकें जिसमें वे अब काम करने में सक्षम नहीं हैं। अपॉप्टोसिस होने के लिए, कोशिकाओं को पहले डीएनए क्षति से गुजरना होगा। एक बार डीएनए क्षति हुई है, कोशिका को कॉसपेज के रूप में ज्ञात एंजाइमों को सक्रिय करेगा। कास्पस एंजाइमों का एक परिवार है जो विशिष्ट साइटों पर डीएनए फाड़ता है। टनल सेल डैथ परीक्षण (TdT) के रूप में ज्ञात एंजाइम का उपयोग करके इस तथ्य का लाभ उठाता है।

TdT डीएनए के किनारों को पहचानने में सक्षम है और जो कासपेस द्वारा कतर दिया गया है। एक बार टीडीटी डीएनए से बंधा हो जाता है, यह डीएनए की कड़ी के अंत में एक न्यूक्लियोटाइड के जोड़ को उत्तेजित करेगा। इस प्रक्रिया को निक अनुवाद के रूप में जाना जाता है। एक न्यूक्लीओटाइड के जोड़ से डीएनए की धार एक नया सिरा बनता है, जिसे एक फ्लोरोसेंट रंग के उपयोग से पता लगाया जा सकता है। टनल के दागने के पीछे यही सिद्धांत है।

जब टनल स्टेनिंग किया जाता है, यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि कोशिकाएं ठीक से स्थिर और व्याप्त है। यह कम से कम 30 मिनट तक पैराफॉर्मलडाइड जैसे एक स्थिर समाधान में कोशिकाओं को इंक्यूबेट किया जा सकता है। कोशिकाओं को रंगने से पहले एक डिटर्जेंट, जैसे कि ट्राइटन एक्स-100, के साथ व्याप्त किया जाना चाहिए। नीचे टनल परीक्षण का उपयोग करते हुए अपॉप्टोटिक कोशिकाओं का पता लगाने के लिए पालन करने के लिए कदम हैं:

- पैराफॉर्मलडाइड में कोशिकाओं को 30 मिनट के लिए ठीक करें

- ट्राइटन एक्स-100 के साथ स्थायी करें

-60 मिनट के लिए टनल प्रतिक्रिया मिश्रण में अवयव करें

- पीबीएस से धोएं और स्लाइड्स पर एक माउंट मीडियम जैसे कि प्रोलांग गोल्ड एंटीफेड रिएजेंट का उपयोग करके माउंट करें

- एक फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप में 405 nm और 525 nm के उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य का प्रयोग करते हुए देखें

टनल के दाग दो प्रकार के उपलब्ध हैं। FITC-dUTP सबसे आम तौर पर इस्तेमाल किया गया दाग है क्योंकि यह बहुत संवेदनशील और उपयोग में आसान है. PI-dUTP कम संवेदनशील है, लेकिन यह फोटोब्लेचिंग के लिए प्रतिरोधी है.

जब टनल रंग किया जाता है, तब एपोटोटिक नाभिकीय नाभिकारों के विरूद्ध डैपी जैसे नकारात्मक दाग का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। यह सुनिश्चित करने में मदद करेगा कि केवल अपोप्टोटिक कोशिकाओं का पता लगाया जाता है। यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि टनल परीक्षण अपॉप्टोसिस के लिए विशिष्ट नहीं है और यह नेक्रोटिक कोशिकाओं का भी पता लगाएगा। गलत सकारात्मक बातों से बचने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि स्टेरोसपोरिन-प्रबंधित कोशिकाओं जैसे सकारात्मक नियंत्रण का उपयोग किया जाए।

स्ट्रेप्टाविडिन-बायोटिन संयोजकों को डीयूटीपी के स्थान पर भी एपोप्टोटिक कोशिकाओं का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस विधि में, ट्यूनेल प्रतिक्रिया मिश्रण में जैव-टैग किए न्यूक्लोटाइडों का प्रयोग किया जाता है। स्ट्रेप्टाविडिन-बायोटिन कांजुगेट फिर बायोटिन टैग्स से जुड़ने के लिए प्रयोग किया जाता है। बायोटिन-टेग किए न्यूक्लिओटाइड्स ह्रास के प्रति अधिक प्रतिरोधी हैं और एक मजबूत संकेत का उत्पादन करेंगे। यह विधि FITC-dUTP या PI-dUTP का उपयोग करने की तुलना में अधिक संवेदनशील है, लेकिन यह महंगा भी है और उतना व्यापक रूप से उपलब्ध नहीं है।

अन्य अपॉप्टोसिस परीक्षणों की तुलना में टनल के दाग लगाने के कई फायदे हैं। पहला लाभ यह है कि टनल रंग अत्यधिक संवेदनशील, विशिष्ट, और उपयोग में आसान है, अन्य तरीकों की तुलना में, जैसे फ्लो साइटोमेट्री या प्रतिरोधी रसायन। इसका मतलब है कि कोशिका के डीएनए क्षतिग्रस्त होने से पहले अपॉप्टोसिस का पता लगाने के लिए टनल के रंग का इस्तेमाल किया जा सकता है।

टनल के रंग का एक और लाभ यह है कि इसे स्थिर कोशिकाओं पर इस्तेमाल किया जा सकता है, जिसका अर्थ है लाइव-सेल इमेजिंग करने की कोई आवश्यकता नहीं है। यह एक महत्वपूर्ण लाभ है, क्योंकि लाइव-सेल इमेजिंग करना मुश्किल हो सकता है और अक्सर महंगी उपकरणों की आवश्यकता होती है। यह एप्पोटोसिस परीक्षणों से एक महत्वपूर्ण लाभ है, जैसे एनेक्सिन वी परीक्षण, जो केवल जीवित कोशिकाओं पर प्रयोग किया जा सकता है। इसके अलावा, टनल रंग फोटोब्लेचिंग के लिए प्रतिरोधी है और विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं पर इस्तेमाल किया जा सकता है।

अंत में, टनलरंग को कोशिका की अधिक पूर्ण तस्वीर बनाने के लिए, डैपी या प्रोपिडियम आयोडाइड जैसे अन्य दाग के साथ संयोजन में इस्तेमाल किया जा सकता है। यह विशेष रूप से तब उपयोगी है जब अपॉप्टोसिस के प्रारंभिक चरणों की जांच की जाती है क्योंकि केवल डेपीआई या प्रोपिडियम आयोडाइड के प्रयोग से डीएनए क्षति का पता लगाना मुश्किल हो सकता है।

टनल के दागने का प्रदर्शन करते समय कुछ महत्वपूर्ण सुझाव याद रखें।

पहला, ताजा पृथक कोशिकाओं का उपयोग महत्वपूर्ण है। यह इसलिए है क्योंकि एपोप्टोटिक कोशिकाएं जल्दी घटती हैं और यदि कोशिकाएं ताजी नहीं हैं तो पता लगाना मुश्किल हो सकता है। जब टनल रंग किया जाए तो ताजा रिएजेंट का उपयोग भी महत्वपूर्ण है। रिएजेंट्स जो लंबे समय के लिए संग्रहीत किया गया है प्रभावी नहीं हो सकता है, और इससे गलत नकारात्मक परिणाम हो सकते हैं।

दूसरा, यह महत्वपूर्ण है कि टनल के तनुकृत दाग का उपयोग किया जाए। यह यह सुनिश्चित करने में मदद करेगा कि कोशिकाओं पर सही दाग लगा हुआ है और गलत सकारात्मक नहीं पता लगाया जाता है। तीसरा, दागदार प्रतिक्रिया को कम से कम 15 मिनट तक जारी रखना महत्वपूर्ण है। अंत में, किसी भी बिना बंधे टनल दाग को दूर करने के लिए कोशिकाओं को रंगने के बाद अच्छी तरह से धोना महत्वपूर्ण है।

रंग की स्थिति को सर्वश्रेष्ठ परिणाम प्राप्त करने के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए। इसके लिए कुछ प्रयोग, परीक्षण और त्रुटि की आवश्यकता हो सकती है। इस ब्लॉग में उल्लेखित सुझावों का पालन करके, आप सुनिश्चित कर सकते हैं कि टनल परीक्षण सटीक और विश्वसनीय परिणाम प्रदान करता है। टनल रंग के बारे में हमारा विस्तृत गाइड यहीं समाप्त होता है। हमें उम्मीद है कि आपको यह जानकारीपूर्ण और उपयोगी लगा है!